《以撒的结合：重生》全人物故事介绍及相关图鉴
犹大（Judas）
犹大通过玩家第一次击败撒旦解锁。前作角色之一。犹大从只有一个心之容器，但是犹大拥有主动道具恶魔之书(The Book Of Belial)并且是拥有最高基础伤害的角色之一。前作犹大拥有4的基础伤害，本作削弱至3，但是依然是最高基础伤害之一。属性为1心之容器3基础伤害1基础射速2子弹飞行速度2基础射程2基础速度1基础幸运，并且出生自带3块钱。
犹大参考《圣经》中耶稣的12门徒。
犹大，耶稣基督最初选立的12使徒之一，负责管帐。路加福音记载，在最后的晚餐中，当主耶稣宣布了圣餐的意义以及作出立约的宣告之后，紧接下去，说了一句令当时的众门徒大吃一惊的一句话：“看哪，那卖我之人的手，与我一同在桌子上。”。这件事给门徒的印象太深了，以致当他们提起那个夜晚，不说“主与门徒守逾越节的那一夜”或“主设立圣餐的那一夜”或“主与门徒立新约的那一夜”，而是“主耶稣被卖的那一夜”！另一方面保罗也以此警诫哥林多教会信徒，在守主餐的事上，当加倍的警醒；要记得那卖主的犹大，他的罪是何等的大！我们也要小心，免得跌倒！
加略人犹大蒙主拣选为门徒，三年与主同在、同行、同桌、同吃；最后竟然以银币三十枚的代价（贩卖奴隶的价格）将耶稣卖给仇敌！主耶稣曾经给他许多可以悔改的机会，但他仍硬心到底，不肯悔改。
按犹太人习惯，坐席前主人会与每一位客人亲嘴，若是如此，主耶稣必也亲了犹大的嘴！未开饭前，主耶稣先为门徒洗脚，主耶稣也必不会漏掉犹大，主耶稣必也洗了犹大的脚！吃饭时，主也特别蘸饼给犹大吃！但犹大仍硬心不悔，按着与祭司长所约定的，当主耶稣在客西马尼园，“趁众人不在跟前的时候”，领人来捉主，并以亲嘴为记号，主最后再以“朋友”呼唤犹大，希望能挽回其心。然而犹大最终不悔改。三本福音书都记载主耶稣论犹大的一句话：人子必要去世，但卖人子的人有祸了！那人不生在世上倒好。路加与约翰都提到“撒旦进入犹大的心”。最后，主耶稣向父神作大祭司的祷告中，称犹大为“灭亡之子”。
西方常用“犹大的吻”代表“叛卖活动”、“阴谋诡计”或“口蜜腹剑”、“犹大”也成为“叛徒”的同义词。西方人忌讳“13”也源于此。耶稣受难后，犹大后悔莫及自缢而死。为补足十二门徒之数，门徒们又补选了马提亚（Matthias，亦译“马弟亚”）以代替加略人犹大。
夏娃（Eve）
夏娃通过一局游戏中两层关卡不捡取任何形式的心（红心魂心黑心永恒之心，但是通过道具获得的心不会算作捡取的心）。前作角色之一，是在万圣节的一次更新中新加入的角色。出生道具死鸟(Dead Bird)以及巴比伦娼妇(Whore Of Babylon)。属性为2心之容器1基础伤害1基础射速2子弹飞行速度2基础射程2基础速度1基础幸运。夏娃的巴比伦娼妇会在红心降低到1颗的时候触发，而不是前作中的降低到半颗红心才会触发。
本作有一个小小的改动，夏娃在变身之后在原地停留一段时间会留下一点黄色的不明液体（论外又是你），而不像前作留下的是红色的液体。这个小小的改动对游戏并没有影响。
夏娃是参考《创世纪》中凭借亚当肋骨而诞生的地球上的第一位女性。
“夏娃”，Eve，在希伯来文中，与“生命”的字形相近，所以夏娃这个名称，与生存有关。创世记3 章20 记著：“亚当给他妻子起名叫夏娃，因为他是众生之母。”可知夏娃这个名字，是亚当为她起的，而这个名字，也有“众生之母”的意思。
夏娃是世界上第一个女人。在人类未犯罪之前，亚当称她为女人，在人类犯罪之后，亚当称她为夏娃。这里有什么特别呢？两个称呼，带出三方面的不同：
第一、“女人”著重在夏娃的来源；而称呼“夏娃”，则暗示出她将成为众生之母的前路。
第二、亚当称呼她为“女人”时，重点在带出她和男人性别的不同，而亚当称她为“夏娃”之后，强调的则是她个人的名字。
第三、亚当称她为“女人”的时候，主要突出她和男人的关系，而亚当称她为“夏娃”以后，却突出了她和众生的关系。夏娃本是从亚当出来的，但以后所有的人类都从女人而出，所以夏娃称为“众生之母”是名副其实的。
参孙（Samson）
参孙通过玩家在两层中无伤来解锁,二合一层只算作一层。首次出现在《以撒的结合》的资料片《羔羊的愤怒》中。本作的参孙具有3个心之容器，而不像前作具有1个心之容器和1颗魂心。出生自带道具嗜血(Bloody Lust)。每次他受到伤害时伤害会提升，进入下一层的时候会重置伤害。属性为3心之容器2基础伤害1基础射速2子弹飞行速度4基础射程2基础速度1基础幸运。
参孙是《圣经》中一位强大的战士，他的力量来源于他的头发，他曾经用一根驴骨头击杀了1000个敌人。
参孙，圣经士师记中的犹太人士师，生于前11世纪的以色列，玛挪亚的儿子，凭借上帝所赐极大的力气，徒手击杀雄狮，并只身与以色列的外敌非利士人争战周旋。非利士让参孙的女人大利拉（也是非利士人）套出参孙神力的秘密，挖其双眼并囚于监狱中受尽折磨。后来，参孙向上帝悔改，上帝再次赐力量，参孙抱住神庙支柱，身体前倾，结果柱子及房子倒塌，压死了在庙中的敌人，自己也牺牲了。这个天生神力的战士，竟因个性顽强、迷恋上别有用心的人而失败，结局令人感慨。
